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ATCC細胞培養(yǎng)常出現(xiàn)的技術(shù)問題解答

發(fā)布時間: 2021-12-07  點擊次數(shù): 939次
   ATCC細胞的培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法,也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。
  對于ATCC細胞的培養(yǎng)常出現(xiàn)的技術(shù)問題我們?nèi)绾握页龃鸢福?/div>
  1.培養(yǎng)用液pH對細胞生長有何影響?
  由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此在配制培養(yǎng)用液時,可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
  2.何為傳代培養(yǎng)?
  在進行傳代時,如果是懸浮細胞,只需簡單稀釋即可,若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀,再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細胞每毫升接種數(shù)量為5´104-8´105個,傳代密度太低,細胞容易死亡,表現(xiàn)出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)液會由于pH下降而呈現(xiàn)黃色,表明細胞已經(jīng)達到最大密度需要換液或進行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細胞,等長滿培養(yǎng)瓶表面,即可進行傳代,多數(shù)細胞需用胰蛋白酶處理將細胞從生長物表面分離下來,以促進傳代培養(yǎng)。
  3.細胞培養(yǎng)的環(huán)境有何要求?
 ?、贌o污染環(huán)境
  培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當(dāng)細胞放置于體外培養(yǎng)時,與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等,可導(dǎo)致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中,保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等,是維持細胞生存的基本條件。
 ?、诤愣ǖ臏囟?/div>
  維持培養(yǎng)細胞旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個別細胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時,細胞全部死亡。
 ?、蹥怏w環(huán)境
  氣體是人體細胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

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